法医毒物分析轨范考据通则SF/T 0063-2020（20200529）

《法医毒物分析轨范考据通则SF/T 0063-2020》由中华东说念主民共和国法令部于2020年5月29日发布，自觉布之日起实行。

目  次

1 范 围

2 范例性援用文献

3 术语和界说

4 基本要求

5 筛选分析

6 定性分析

7 定量分析

8 毒物分析轨范考据

附录A（贵寓性附录）轨范考据示例

1范 围

本圭臬章程了生物基质中毒（药）物偏执代谢物分析轨范考据的基本要求。

本圭臬适用于实验室对非圭臬轨范、实验室制定的轨范、超出其预定范围使用的圭臬轨范以及彭胀修悔改的圭臬轨范等进行轨范考据。本圭臬只波及色谱和色谱-质谱联用分析轨范且不包括采样部分。

2范例性援用文献

下列文献关于本文献的期骗是必不可少的。但凡注日历的援用文献，仅注日历的版块适用于本文献。

但凡不注日历的援用文献，其最新版块（包括通盘的修改单）适用于本文献。

GB/T 13966 分析仪器术语

GB/T 27417 及格评定化学分析轨范阐发和考据指南

GB/T 32465 化学分析轨范考据阐发和里面质地限度要求

GB/T 32467 化学分析轨范考据阐发和里面质地限度术语及界说

GB/T 35655 化学分析轨范考据阐发和里面质地限度实施指南色谱分析

GB/Z 35959 液相色谱-质谱联用分析轨范通则

GA/T 122 毒物分析名词术语

SF/Z JDO107019 法医毒物有机质谱定性分析通则

3术语和界说

GB/T 13966，GB/T 27417，GB/T 32465，GB/T 32467，GB/T 35655，GB/Z 35959，GA/T 122以及SF/Z JD0107019界定的术语和界说适用于本文献。 

4基本要求

实验室应基于与测试样同样或相似的生物基质进行分析轨范的考据，并凭证轨范的预期用途，礼聘需要考据的轨范性能看法。

5筛选分析

筛选分析轨范考据性能看法要求如下：

a）礼聘性；

b）检出限；

c）稀释可靠性（必要时）；

d）郑重性（必要时）

6定性分析

定性分析轨范考据性能看法要求如下：

a）礼聘性；

b）蔓延效应；

c）基质效应（适用LC-MS分析）；

d）检出限；

e）稀释可靠性（必要时）；

f）郑重性（必要时）

7定量分析

定量分析轨范考据性能看法要求如下：

a）礼聘性；

b）蔓延效应；

c）基质效应（适用LC-MS分析）；

d）线性范围；

e）精密度；

f）准确度；

g）检出限；

h）定量限；

i）索求回收率；

j）稀释可靠性（必要时）；

k）郑重性（必要时）。

8毒物分析轨范考据

8.1 礼聘性

分析轨范应具有一定的礼聘性，通盘筛选、定性和定量分析轨范都粗鲁基质、内标等过问进行评估，以保证检测效果的可靠性。具体要求包括：

a）应分析至少10个不同起首的空缺样，不雅察色谱出峰情况，检讨在方向物出现的区域是否存在过问；b）应在空缺样中添加内标或潜在的过问物，检讨是否存在过问；c）如存在过问，可采取优化仪器条目、优化前处理轨范、篡改色谱条目等次序来摒除过问。若如实存在小数过问物资不影响定量分析效果，应解说定量限的准确度和精密度在可秉承的限定内。8.2 蔓延效应蔓延效应可影响后续样品的分析效果，很是是测试样批量分析时，蔓延效应可能酿成定性、定量分析效果的不准确。具体要求包括：a）应在高浓度的样品概况校准弧线最高浓度点样品后紧接着分析空缺样，并通过空缺样来评价蔓延效应。宜类似测定3次；b）优化分析轨范以摒除蔓延效应。但若是蔓延效应不可摒除，则应注明限度蔓延效应的次序示例：在高浓度测试样后加一个空缺样，且后续测试样中的信号反应高于空缺样的信号反应10倍以上，不然，后续测试样需要从头索求再检测。蔓延效应的考据示例参见附录A。8.3 线性范围分析轨范应凭证测试样的预期浓度或含量范围细则校准弧线的线性范围。具体要求包括：a）配制校准弧线的样品应包含一个空缺样（不含方向物和内标的基质样品）、一个零点样品（空缺样加内标）和一定梯度的6个以上浓度点样品；b）校准弧线的最低浓度点应鉴别检出限，位于定量限隔壁，中间点为分析方向物平日检测平均浓度水平，最高校准点浓度为预期浓度范围的最高点或接近最高点；c）校准弧线的浓度点应尽可能均匀地踱步在线性范围内，每个浓度点至少需5个平行样品，且5个平行样品需在不同批次进行分析；d）应礼聘一种合适的数学容貌来表述校准弧线的各浓度点的反应值（通常为方向物与内标峰面积的比值）与浓度的相关关系。通常一元线性回顾适用于等变异的数据，若线性回顾模子存在异方差性，则可选用权重所有1/x或1/x以赔偿异方差性。如有需要，也可汲取非线性回顾；e）不同浓度点的5个平行样品宜放在一皆进行相关关系分析。校准弧线可用作图法（反应值y/浓度x）或盘算推算回顾方程（y=ax+b）暗意。一般限度相相关数R=0.99；f）若是一条校准弧线在最低浓度到最高浓度范围内不可得志相关要求，可筹议分多段制作校准曲校准弧线的考据示例参见附录A。8.4 准确度准确度和精密度可同期进行测验，应汲取质地限度样品（简称质控样）进行评估。配制校准弧线与质控样的圭臬溶液应分一名重或稀释，如有可能，则使用不同起首的圭臬物资。准确度通常汲取偏倚暗意，即为测定平均值和参考值的差值与参考值的百分比，应限度在±15%之内，定量限处则在±20%之内。具体要求包括：a）质控样包括定量限、低、中庸高四个浓度。凭证轨范，定量限与低浓度可为并吞质控样，概况低浓度为定量限的3倍，中浓度为校准弧线的中间浓度，高浓度接近校准弧线的最高浓度；b）每个浓度点应配制3个质控样，按所建立的轨范分析，获得测定值。同样操作应联贯进行5天；c）有条目时，实验室还可通过分析有证参考物资及插手才气考据来评价准确度。8.5 精密度精密度应汲取偏差或相对圭臬偏差（RSD）暗意，相对圭臬偏差也称变异所有（CV），并可细分为日内精密度和白昼精密度。生物样品定量分析轨范的RSD应限度在15%以内，在定量限处RSD应小于20%。具体要求包括：a）汲取定量限、低、中庸高四种浓度的质控样，每个浓度点至少配制3个质控样，按所建立的轨范分析，获得测定值。同样操作联贯进行5天；b）日内精密度是并吞批次、一天之内进行的精密度测验。按式（1）盘算推算日内精密度：

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8.6 检出限通盘轨范均应细则检出限，在得志定性阐发的要求下，可汲取以下两种轨范盘算推算：a）信噪比法迟缓稀释低浓度添加样品，应有至少三个不同起首的空缺基质添加样品，至少分析三个批次。考取方向物出峰隔壁的一段基线为参照，仪器可自动盘算推算遴选色谱峰的信噪比（S/N），以SN>3时且顺应定性要求（举例：保留时刻、峰形和离子丰采比等）的添加样品最低浓度为检出限。b）校准弧线法

凭证至少三条安祥的校准弧线的斜率及在y轴上截距的圭臬偏差，按式（3）求出检出限：

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8.7 定量驱散量分析时应细则定量限，可汲取以下两种轨范盘算推算，但均应得志精密度和准确度的要求。a）信噪比法迟缓稀释低浓度添加样品，应有至少三个不同起首的空缺基质添加样品，至少分析三个批次。考取方向物出峰隔壁的一段基线为参照，仪器可自动盘算推算遴选色谱峰的信噪比（S/N），以S/N>10时且得志精密度和准确度要求的添加样品最低浓度为定量限。b）校准弧线法将校准弧线最低浓度点手脚定量限。应有至少三个不同起首的空缺基质添加样品，至少分析三个批次，以保证得志精密度、准确度的要求。8.8 基质效应、索求回收率基质效应是LC-MS分析时存在的一个十分昭彰的风物，进展为离子增强或扼制作用。索求回收率与基质效应可同期测验。具体要求包括：a）汲取低和高两个浓度的质控样，每个浓度点应使用至少6个不同起首的空缺样，不应使用合并的基质；

b）汲取至少6个不同起首的空缺样，分辩进行三组实验（见表1），仪器分析前定容试剂和定容体积同样，然后获得三组的峰面积均值，按式（4）和（5）盘算推算基质效应和索求回收率。

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8.9 郑重性为了保证分析效果的准确性和重现性，必要时可凭证具体情况，若是样品、处理后的样品等存在可能的不郑重成分时，可考据郑重性。具体要求包括：a）冻融郑重性1）应汲取至少低和高两个浓度点的质控样，每个浓度点9个类似质控样；2）每个轮回应最初-20℃冷冻24h，然后室温放弃24h溶化；3）每个冻融轮回后（-20℃到室温），应测定3个质控样。共类似3个冻融轮回；4）冻融郑重性应至少类似测定两次；5）将处理后的样品测定分析方向物的信号反应（举例：方向物峰面积或方向物与内标的峰面积比值），与新配制的质控样方向物的信号反应进行相比；6）偏倚在±15%之内，可以为反复冻融后郑重。b）永恒郑重性1）应汲取低和高两个浓度点的质控样，每个浓度点3个类似质控样；2）按照平日责任要求，应在-20℃冷冻本色样品，保存一定时刻，然后进行预处理、分析，测定分析方向物的信号反应（举例：方向物峰面积或方向物与内标的峰面积比值），并与新配制的质控样方向物的信号反应进行相比；3）偏倚在±15%之内，可以为一定时刻内保存郑重c）处理后样品的郑重性1）应汲取低和高两个浓度点的质控样，每个浓度点3个类似质控样；2）经索求处理后，应在自动进样器中或按本色情形放弃2h-24h概况更永劫刻，测定分析方向物的反应（举例：方向物峰面积或方向物与内标的峰面积比值），并与新配制的质控样进行相比；3）偏倚在±15%之内，可以为处理后样品郑重。8.10 稀释可靠性必要时，可凭证具体情况礼聘考据稀释可靠性，样品稀释后不应影响准确度和精密度。在空缺样中添加方向物至高于校准弧线最高点的浓度，用同样的空缺基质稀释该样品，然后按照已建立的轨范分析。应至少分析三个批次，稀释后的准确度和精密度在可秉承的范围内，偏倚应在±15%之内，精密度RSD应在15%以内。注：8.1-8.10的要求是实验室对毒物分析轨范考据的最低要求，性能看法的序号不代表考据实验规矩。

附录A（贵寓性附录）轨范考据示例

A.1 轮廓

本附录先容血液中氯胺酮的液相色谱-串联质谱分析轨范中，校准弧线、蔓延效应、基质效应和索求回收率的考据示例。A.2 校准弧线和蔓延效应预期建立10ng/mL～1000ng/mlL浓度范围内且为线性回顾的校准弧线。在空缺血液中添加氯胺酮圭臬物资，配制系列浓度为10ng/ml，20ng/ml，50ng/mlL、100ng/mL。250ng/mL，500ng/ml，1000ng/ml，1500ng/mlL。和2000ng/mL的添加样品。每个浓度点的添加样品安祥类似5次。每个浓度点后平分析空缺样以评价蔓延效应。效果标明，在10ng/ml~ 1500ng/mL浓度范围内均未见蔓延效应，2000ng/mL的添加样品后分析的五个空缺样中，有两个空缺样不雅察到小数蔓延效应，但均小于校准弧线最低浓度点即10ng/mL的10%，因此蔓延效应在可秉承范围内五次校准弧线获得的数据见表A.1。按照已建立的轨范分析，以添加浓度值为横坐标，氯胺酮与内标的峰面积比为纵坐标，5次类似测量数据叠加作图，获得的校准弧线见图A.1。在图A.1中，浓度在1000ng/mlL以上的数据出现障碍。图A.2为圭臬残差值的踱步，效果潜入，圭臬残差值并未以0点为中心立地踱步。因此在10ng/ml~2000ng/ml.范围内线性方程回顾分歧适。

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因倾向汲取线性回顾，因此去除1500ng/mL和2000ng/mL两个浓度点从头进行校准弧线的拟合，况且也曾顺应预期浓度范围。新的校准弧线和圭臬残差值的踱步见图A.3及图A.4，圭臬残差值以0点为中心立地踱步，因此线性方程回顾建设。天职析轨范血液中氯胺酮的线性范围为10ng/ml~1000ng/mL，线性方程为y-0.0039x+0.0012，相相关数R>0.999，未使用权重。

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A.3 基质效应和索求回收率用于测定索求回收率和基质效应的质控样遴选为50ng/mL.和800ng/mlL两个浓度点。按照A，B、C三组实验。对相应浓度的氯胺酮责任溶液进行仪器分析，类似进样至少6次，获得氯胺酮的峰面积均值（A）；汲取6个不同起首的空缺血液，按照已建立的轨范前处理，添加同样浓度的氯胺酮责任溶液，然后进行仪器分析，获得氯胺酮的峰面积均值（B）；汲取6个不同起首的空缺血液，添加同样浓度的氯胺酮责任溶液，按照已建立的轨范前处理，定容同样体积，然后进行仪器分析，获得氯胺酮的峰面积均值（C）。按式（4）和式（5）盘算推算获得基质效应和索求回收率。详见表A.2和表A.3。

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讼师简介

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戴卫祥，男，党共中员，工学、法学学士，高等讼师，辽宁瑞畅讼师事务所创举合推进说念主、主任，大连仲裁委员会（大连海外仲裁院）仲裁人，大连市湖南商会法律照管人。2017年3月至2020年3月担任大连市法令局法律照管人；2017年7月至2022年7月被辽宁省法令厅选任为省级东说念主民监督员；2019年8月被入选大连市委市政府法律照管人名单；2021年担任大连银行法律照管人，并入选大连市医疗保险局“医疗保险智库群众”。2020年被辽宁省讼师协会评定为2018—2019年度“辽宁省优秀讼师”，被大连市讼师协会评定为2019年度“优秀讼师”。

2001年从事法律责任，具有多年讼师执业告戒及4年工程开拓现场不休告戒，先后担任恒大集团大连公司、辽宁公司监察室主任。专谛视要、疑难案件和法令已然，坚握“莫得问题不贬责”的信念，执业以来，代理过开拓工程造价已然、工程质地已然、刑事伤情已然、毒品已然、子弹已然、医疗挫伤已然、灵活车交通事故已然、亲子已然、环境挫伤已然等各样法令已然和疑难案件，积存了丰富的办案告戒，并生效代理过多起通过法令已然细则无罪的刑事、法令已然行政阐发等案件，在法令已然专科有深入、系统的商榷和实验。

讼师简介

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纪海心，女，大连海事大学法学学士，辽宁瑞畅讼师事务所主任助理。实习时间，协助讼师办理过民间假贷纠纷、开拓施工协议纠纷、婚配纠纷、灵活车交通事故牵累纠纷等案件，积存了丰富的法律学问和办案告戒，具有细腻的交流合营才气。

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